高一生物课文菊花的组织培养课件

无论是在哪一门科目的学习中同学们都需要对教案进行了解，掌握到学习的技巧，在学习中才能够取得进步。下面学大为大家提供的是高一生物课文菊花的组织培养课件，希望同学们能够在学习中取得进步。

知识目标：

1、能准确说出“愈伤组织”、“脱分化”、“再分化”、“外植体”等概念

2、能说出植物组织培养的过程

3、知道影响植物组织培养的因素及其影响原理

4、了解植物组织培养的实验操作过程

能力目标：

1、理解配制母液的必要性，能利用提供的母液进行MS固体培养基的配制

2、能规范、准确的进行外植体消毒、接种等操作

3、尝试对自己所得培养结果进行评价，分析成功或失败的原因

情感、态度、价值观目标：

1、通过菊花组织培养的实验，培养严谨科学的实验作风

2、体会生命之美，进一步激发学习生物的兴趣

课时安排：2课时

学习过程：

第一课时(理论课)

生：自主阅读课本32-33页，完成第一课时的填空

师：在学生自学的基础上结合以下参考答案进行评价，并对重点进行强调

一、基础知识：

植物组织培养技术：

指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞等，并使其生长、增殖、分化以及再生长成植株的技术。

1、植物组织培养的基本过程：

知识回顾：

1)细胞分化：在植物的个体发育过程中，细胞在程;细胞分化的原因是 基因的选择性表达 。

2)植物组织培养的原理是，即 新知拓展：

1)离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，通过 细胞分裂 形成 愈伤组织 ，其特点有 细胞排列疏松无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞 。

2)由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，被称为细胞的 脱分化 ，也称。

3)将愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化出化 。

4

移栽成活

教师强调：

1)细胞或组织必须在离体的情况下才能表现出全能性;

2)愈伤组织的特点;

3)植物组织培养的基本过程。

2、影响植物组织培养的因素：

1)外植体的选取：

不同的植物组织，培养的难易程度差别很大;对于同一种植物材料，材料的 年龄、保存时间 等也会影响实验结果。对于菊花的组织培养，一般选用 未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 。

2)培养基的营养条件：

知识回顾：

培养微生物的培养基一般含有 碳源 、 氮源 、 水 、 无机盐 等物质，有的还需加入 特殊的营养物质 。

新知拓展：

进行植物组织培养常使用 MS培养基，其主要成分包括：大量元素，如 N、P、K、Ca、Mg、S ;微量元素，如 B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co ;有机物，如 甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖 ;往往还需要添加植物激素，如 生长素、细胞分裂素 。

3)植物激素的浓度、使用先后顺序及用量比例等：

知识回顾：

生长素的作用： 促进生物体生长，主要是促进细胞的伸长 ;

细胞分裂素的作用： 促进细胞分裂 。

新知拓展：

4除了上述因素外， pH 、 温度 、 光照 等环境条件也很重要，进行菊花组织培养时，一般将pH控制在 5.8左右 ，温度控制在 18-22℃ ，并且每日用日光灯照射 12h 。

教师强调：

1)生长素和细胞分裂素的使用比例对根、芽分化的影响;

2)实验时，往往使用植物激素类似物，如2,4-D，KT等;

3)实验中要用日光灯进行光照的原因：光照在植物组织培养过程中起着非常重要的作用，在外植体诱导形成愈伤组织的过程中其实是应该保持黑暗的，光照会抑制愈伤组织的诱导。愈伤组织再分化成试管苗的过程是需要光照的，主要是因为叶绿素的形成需要光照。至于为什么用日光灯而不用热光源，并没有资料可查，在光照培养箱中，有专门的恒温设施，其实并不需要靠热光源来维持温度。

第二课时(理论+实验课)

生：阅读课本34页前两部分内容，尝试完成第二课时的内容

师：在学生自学的基础上结合以下参考答案进行评价，对重点进行强调，并进行示范操作

生：在教师指导后进行外植体消毒、MS培养基配制、接种等操作

实验准备：(加粗的为教师在预实验过程中需要先为学生准备好的!)

MS培养基的配制：

配置好母液1-母液5各1000ml(蓝盖大瓶、1000ml容量瓶、分析天平、称量纸、钥匙、无菌水、各种药品)，托盘天平带砝码(每组一台)，蔗糖(每组一瓶)，琼脂粉(每组一瓶)，500ml锥形瓶(每组一只)，10ml量筒(每组一只)，250ul微量移液器带枪头(每组一把)，pH试纸(每组若干)，玻璃棒(每组一只)，无菌水(每组一瓶)，HCl溶液(每组一瓶)，NaOH溶液(每组一瓶);

外植体消毒：

长约3cm胡萝卜形成层外植体(用打孔器在胡萝卜上打下，呈圆柱形)(每组5个)，牙刷(每组5把)，吸水纸(每组若干)，镊子(每组一把)，装有70%酒精的小烧杯(每组一个)，装有0.1%氯化汞溶液的小烧杯(每组一个)，装有无菌水的小烧杯(每组一个)，无菌PV管(每组五个，用于装消毒过的外植体)，标记笔(每组一支)。

接种操作：

超净工作台(至少保证6台能正常使用，每班的12组同学分两批进行操作)，无菌的100ml锥形瓶或专业的接种瓶(每台5个，将灭菌后的培养基分装其中并用封口膜扎紧)，酒精灯(每台一只)，火柴(每台一盒)，装有酒精棉球的广口瓶(每台一只)，滤纸(每台若干张)，刀片(每台一张)，镊子(每台一把)，标记笔(每台一支)。

上课方案：

在第一节理论课时，将外植体消毒和接种的操作一并向学生讲解，第二节课进入实验室后，全班先进行外植体的消毒(10min);然后前六组的同学进入小实验室进行接种操作(15min，每个组一台超净工作台，5个同学轮流做，每人3min左右。3名教师分别于3间小房间对学生进行现场指导，第一个班的培养基由教师准备好);后六组的同学留在教室中听老师讲解MS培养基的配制，并完成称量和量取母液的工作(15min);最后，前六组和后六组的同学进行交换。

二、实验操作：

说明：由于菊花要9月上市，本实验用胡萝卜的形成层代替菊花茎段进行实验，在激素用量、接种操作、培养条件等方面与菊花的组织培养略有差异。

胡萝卜的组织培养操作流程：

制备MS固体培养基 → 外植体消毒 → 接种 → 培养 → 移栽 → 栽培

1、制备MS固体培养基：(参见课本84页MS培养基配方)

1)配制各种母液：(教师已配好)

母液1：大量元素10倍浓缩液

1000ml配制方法：分别称取16.5g硝酸铵、19g硝酸钾、1.7g磷酸二氢钾、3.7g硫酸镁、4.4g氯化钙，用无菌水定容至1000ml;

母液2：螯合铁盐母液

1000ml配制方法：分别称取5.57g硫酸亚铁、7.45g乙二胺四乙酸二钠，用无菌水定容至1000ml，配制1000mlMS培养基时，取5ml螯合铁盐母液;

母液3：微量元素1000倍浓缩液

1000ml配制方法：分别称取硫酸锰、硫酸锌、硼酸、碘化钾、钼酸钠、 0.025 g硫酸铜、 0.025 g氯化钴，用无菌水定容至1000ml;

母液4：有机物100倍浓缩液

1000ml配制方法：分别称取维生素B1、 0.05 g维生素B6、 0.05 g烟酸、 10 g肌醇，用无菌水定容至1000ml;

母液5：植物激素母液

1000ml配制方法：分别称取0.2g生长素类似物2,4-D，0.15g细胞分裂素类似物KT，用蒸馏水定容至1000ml，配制1000mlMS培养基时，取10ml植物激素母液。

教师强调：

1)称量时需要用到非常精确的分析太平，定容至1000ml时，需要用到容量瓶;

2)需要配制母液的原因：MS培养基有二十多种成分，且很多成分用量极其微少，为了避免每次配制都要称量几十种成分，同时防止称量误差，将各种成分按比例浓缩制成母液，使用时，根据浓缩比例取用相应体积的母液即可。

2)利用母液配制固体培养基：(学生分组操作，每组配制500mlMS培养基，母液用量参照上一步) 用托盘天平称取 15 g蔗糖和 5 g琼脂，放入500ml锥形瓶中，用量筒依次量取母液1 50 ml、母液2 、母液、母液，再用微量移液器(枪)取母液均置于已放入蔗糖和琼脂的锥形瓶中，用无菌水定容至500ml。最后，利用pH试纸检测培养基溶液的pH，用HCl或NaOH溶液将培养基pH调至5.8。

3)灭菌：(教师完成，培养基留给下一个班使用)

教师强调：

1)量筒量取了母液1之后，务必用无菌水洗净并将无菌水倒干之后方可量取母液2;

2)用锥形瓶直接定容而不用容量瓶的原因是，此时的琼脂粉尚未加热熔化，不方便转移，在锥形瓶中定容可以在灭菌时一并加热熔化，不会造成物质的损失;

3)测量pH时，应用玻璃棒蘸取少许培养基在pH试纸上检测;

4)调整pH时，应少许加入HCl或NaOH，不应反复调整，使得培养基中有过多的氯离子和钠离子。

2、外植体消毒：(学生分组操作，并提到第一节课讲解)

用于离体培养的植物器官或组织片段，叫做 外植体 。

1)流水冲洗：

用流水冲洗老师提供的胡萝卜外植体，在冲洗过程中用牙刷轻轻刷洗，约2min;

2)酒精消毒：

用吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数 70% 的酒精中摇动 2-3次，持续 6-7 s;酒精消毒后立即将外植体取出，在 无菌水 中清洗;

3)氯化汞消毒：

清洗后用吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为 0.1% 的氯化汞中1-2min;

4)无菌水漂洗：

取出后，在无菌水中至少清洗 3 次，漂净消毒液。将消毒后的外植体放入指定容器中备用，并在容器上做好标记。

教师强调：

1)消毒时既要考虑消毒效果，同时又要考虑外植体的耐受能力;

2)氯化汞有毒，使用时要特别小心，用后立即洗手，避免氯化汞入口。

3、接种：(学生分组操作，并提到第一节课讲解)

1)教师在接种前10min打开超净工作台紫外灯，对其进行灭菌;

2)学生操作前应在老师指导下关闭紫外灯，打开普通光源，准备接种;接种前用体积分数为70%的酒精将工作台和操作者的双手擦拭一遍，擦拭完后，点燃酒精灯;

3)在超净工作台上垫一张无菌滤纸，将刀片在酒精灯上灼烧进行灭菌，用灭菌过后的刀片在滤纸上将之前消毒过的胡萝卜外植体切成约1mm厚度的薄片;

4)将装有培养基的锥形瓶排列在酒精灯左侧，左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左右持瓶，使瓶口旋转通过火焰，右手用镊子夹取切好的小圆片放入培养基中(镊子使用前应进行灼烧灭菌)，每瓶约接种5片小圆片;

5)接种后，将封口膜重新扎好，并在锥形瓶上做好标记。

教师强调：

1)各个步骤严格注意无菌操作;

2)避免受到紫外光的直接照射。

4、培养：

接种后的锥形瓶放在无菌光照培养箱中进行培养，温度控制在25℃，在黑暗中进行培养;若是进行菊花的组织培养应将温度控制在 18-22 ℃，并且每日用光照照射 12 h。

5、移栽：

在移栽之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养箱中生长几日。然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。

6、栽培：

将幼苗移栽后，每天观察记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥、直至花开。

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在高中的学习中同学们要掌握到学习的技巧，上文学大为大家提供的是高一生物课文菊花的组织培养课件，希望大家了解。